Técnica de hibridación para la leucemia mieloide crónica

  Leucemia mieloide crónica

La leucemia mieloide crónica (LMC) es una de las neoplasias humanas mejor caracterizadas, típicamente asociada a la translocación entre los cromosomas 9 y 22 que da lugar al gen de fusión BCR::ABL1, detectable en la mayoría de los casos mediante hibridación in situ fluorescente (FISH) y cariotipo.

Imagen obtenida de:https://fcarreras.org/blog/paradigmalmc/

Pasos de la Hibridación In Situ Fluorescente (FISH) en el diagnóstico de LMC:

1. Recolección de muestra: Se obtiene una muestra de médula ósea o sangre periférica del paciente con sospecha de LMC.
2. Preparación celular: Se realiza un cultivo celular y tratamiento para obtener células en metafase. Las células se fijan y se colocan sobre un portaobjetos.
3. Desnaturalización del ADN: El ADN cromosómico se desnaturaliza mediante tratamiento térmico o químico, para permitir el acceso de las sondas.
4. Hibridación de la sonda: Se añaden sondas fluorescentes específicas para los genes BCR (cromosoma 22) y ABL1 (cromosoma 9). Estas sondas están marcadas con fluorocromos diferentes (por ejemplo, verde para BCR y rojo para ABL1). Si existe una fusión BCR::ABL1, las señales se superponen y forman una señal amarilla (fusión).
5. Lavado post-hibridación: Se eliminan las sondas no unidas mediante lavados específicos.
6. Contratinción: Se tiñe el núcleo con DAPI u otro colorante fluorescente para facilitar la visualización del núcleo celular.
7. Visualización: Se examina la muestra bajo un microscopio de fluorescencia. Se analizan al menos 200 núcleos/interfases o metafases buscando patrones de señal: señales separadas indican normalidad; señales fusionadas indican translocación.
8. Interpretación de resultados: En este caso particular, FISH fue negativo a pesar de la presencia de la fusión BCR::ABL1, debido a una inserción extremadamente pequeña (122 kb) que no fue detectada por las sondas comerciales estándar.

Video obtenido de: https://www.youtube.com/watch?v=ZKr53uObMIQ

Referencias bibliográficas:

1. May PC, Reid AG, Robinson ME, Khorashad JS, Milojkovic D, Claudiani S, et al. FISH-negative BCR::ABL1-positive e19a2 chronic myeloid leukaemia: the most cryptic of insertions. BMC Medical Genomics [Internet]. 26 de julio de 2023[citado el 15 de junio de 2025];16(1). Disponible en: https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC10369825/